柱式深加工产品基因组DNA提取试剂盒

产品货号：

GS0072

中文名称：

柱式深加工产品基因组DNA提取试剂盒

英文名称：

Czup Food gDNA Extraction Kit

产品规格：

50次|100次

发货周期：

1～3天

产品价格：

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本试剂盒是专门用于深加工产品基因组DNA提取的试剂盒，深加工产品经过煮、煎、炸、腌制和发酵等数道工序制备而成，其原材料经过高温，机械损伤和极端环境（强酸强碱等）处理，其基因组DNA严重断裂和降解。因此，从深加工产品中抽提基因组DNA存在一定的困难。本试剂盒将经典的CTAB裂解法和硅胶膜吸附柱相结合，CTAB裂解法保证深加工产品充分裂解，释放出其中的基因组DNA，然后通过一系列的处理将其中的杂质清除，得到的上清液中的基因组DNA采用硅胶膜吸附柱吸附，然后通过吸附柱DNA复合物的洗涤过程，清除吸附的杂质，最后在最佳的洗脱条件下获得基因组DNA。采用本试剂盒所得到的基因组DNA质量高，可直接用于后续的real time qPCR检测。

通用型深加工产品基因组DNA提取试剂盒，适用于各种深加工食品材料。
采用经典的硅胶膜吸附柱，吸附效率高，吸附速度快。
获得DNA纯度高，后续检测抑制作用弱。

组分	50次	100次
Buffer GMO	60mL	120mL
Buffer GMP	60mL	120mL
Buffer DRL	20mL	40mL
Wash Solution	12mL	24mL
Proteinase K	1.2mL	2.4mL
TE Buffer(pH8.0)	10mL	20mL
吸附柱及收集管	50套	100套

保存：室温

Buffer MGO和Buffer GMP中含有刺激性的化合物，操作过程中应穿上实验服，戴好乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服，防止吸入口鼻。沾染皮肤或眼睛后，请立即用清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医生的帮助。

准备工作

自备材料：水浴锅、离心机、2mL离心管和无水乙醇。
请提前将水浴锅调至65℃备用。

样品处理
- 固态产品：取足量的固态食品，液氮或者机械研磨至粉末，称取100～200mg的食品粉末至2mL离心管中。
- 豆浆等液态产品：取20mL液态食品于50mL离心管中，12000rpm离心10min，弃上清。
- 加工处理的干燥植物组织及中草药：取经液氮研磨的100～300mg干燥的植物组织或者中草药粉末至2mL离心管中。
向上述含有生物材料的离心管中加入1mL GMO Buffer和20μL proteinase K，充分振荡混匀，65℃水浴30min，间或振荡混匀。
- 依据食品材料的体积和大小，可以适量调节GMO Buffer的加量，食品材料需要完全浸没在GMO buffer中才能保证充分裂解。
- 如果需要获得无RNA污染的基因组DNA，需要同时加入20μL 10mg/mL RNase A。
12000rpm离心10min，吸取全部上清。
向上清中加入400μL氯仿，充分混匀，12000rpm离心10min，转移上清至新的离心管中。
向上清中加入2倍体积的GMP Buffer，充分混匀，12000rpm离心5min，弃上清。
- 如果需要提高基因组DNA的得率，可以加入GMP buffer充分混匀之后放置5～10min。
- 弃上清时请勿吸到沉淀，否则影响最后基因组的得率。
向沉淀中加入350μL DRL Buffer，充分悬浮沉淀物。
向上述溶液中加入300μL无水乙醇，充分混匀，将其全部转移至吸附柱中，室温放置2min，10000rpm离心2min，倒掉收集管中溶液，将吸附柱放回收集管中。
向吸附柱中加入500μL Wash Solution，10000rpm离心1min，倒掉收集管中溶液，将吸附柱放回收集管中。
- Wash Solution使用前请检查溶液是否按比例加入无水乙醇。
重复步骤8一次。
将吸附柱放回收集管中，12000rpm离心2min。
- 此步骤决不能省略，否则残留的乙醇会严重影响后续实验。
取出吸附柱，放入一个新的1.5mL离心管中，在吸附膜中央加入50μL TE buffer，静置3min，12000rpm离心2min，得到DNA溶液置于-20℃保存或者直接用于后续实验。
- 如果想提高DNA的得率，可重复步骤11或将TE buffer 60℃预热。

得率低
- 取样量太少。不同的食品材料含有的基因组DNA千差万别，如果需要可以在说明书给定的范围做各食品材料起始量的梯度，获取最佳的材料用量。
- 样品裂解不充分。对于固态食品材料，需要将其充分研磨成粉末之后加入裂解液，裂解期间间或混匀，保证裂解充分；
  液体食品材料需要高速离心取沉淀，然后再加入裂解液，离心机转速一定要在10000rpm以上。
- 结合不充分。第7步上柱后应室温放置2min，让DNA与吸附柱重复结合。
- 洗脱液不合适。洗脱缓冲液的pH值对洗脱效率有影响，如果使用水进行洗脱，请确保其pH值> 7.5，pH值过低可能导致低洗脱效率。
获得的DNA条带弥散或者电泳没有可见条带
- 食品材料都是经过深加工处理，其原材料中的DNA已经断裂降解，电泳获得DNA条带弥散属于正常现象；另外，一些DNA含量极少的食品材料，电泳条带不可见，需要后续real time qPCR验证才能知道是否获得目标DNA。
获得的DNA粘稠不纯
- 诸如淀粉类食品材料如面粉，饼干等，这些食品材料中淀粉含量丰富，所以处理过中需要严格按照说明书进行，离心力一定达到说明书要求，吸取上清时要彻底。
DNA样品不纯，抑制或者干扰后续实验
- 乙醇有残留。吸附柱洗涤之后需要12000rpm空转2min，然后在室温放置几分钟晾干。
- 若初始材料取样太多也会造成DNA纯度不行。食品材料一定按照说明书要求进行。

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